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2019/2/12 15:38:21
~RNA pulldown技术是从RNA出发研究RNA与蛋白及RNA相互作用的关键技术。利用pulldown技术可以高效的富集与目的RNA相互作用的蛋白或者RNA。RNA pulldown结合高分辨质谱可以鉴定与目的RNA相互作用的未知蛋白,探索RNA结合蛋白质组;通过高通量测序可以鉴定与目的RNA相互作用的未知RNA。同时可以通过免疫印迹或者RT-PCR鉴定已知的相互作用。RNA pulldown是研究RNA与蛋白、RNA相互作用,探索RNA生物学功能的必备技术。
RNA pulldown主要是基于“生物素-链霉亲和素”相互作用的原理建立的实验技术,分RNA直接标记法和探针法,应用于不同的实验要求。RNA直接标记法需首先将RNA基因克隆在T7启动子下游,并借助T7 RNA聚合酶体外转录出目的RNA。随后对RNA进行末端生物素标记,并用链霉亲和素磁珠去拉与RNA结合的蛋白或者RNA。此方法主要应用于线性RNA。探针法则是根据目的RNA序列特点及空间构象,设计合适DNA或者RNA反义探针并标记生物素,利用碱基互补配对原则富集目的RNA并将RNA结合的蛋白、RNA一并拉出来。此法主要应用于环状RNA或者多转录本线性RNA合并pulldown分析。
本试剂盒是专门为探针法设计的RNA pulldown试剂盒。试剂盒包含了pulldown及RNA富集所需试剂,可以有效的富集目的环状RNA或者线性RNA以及与其相互作用的蛋白和RNA。富集产物可以纯化蛋白,也可以纯化RNA供下游分析。
 
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