说明书下载链接 ：2* qPCR SYBR Green Master Mix
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货号 |
有无Rox |
规格 |
适配仪器 |
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SB-Q201 |
No rox |
5*1ml |
Roche: LightCycler 480/LightCycler 96; |
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Bio-Rad: iCycleriQ / iq 5; CFX96 / CFX 384; |
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Themo; PikoRerl |
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Lllumina; Eco |
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其他不需要Rox校准的仪器 |
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SB-Q202 |
Low rox |
5*1ml |
ABl: Prism 7500 / 7500 Fast / QuantStudio; 3/5Systen: QuantStudio 6 / 7FlexSystem:ViiAsystem |
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其他需要LOW Rox校准的仪器 |
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SB-Q203 |
High rox |
5*1ml |
ABl:Prism 7000/7300/7700/7900HT:StepOne/ StepOnePlus |
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其他需要High Rox校准的仪器 |
反应体系
1.充分溶解并混匀qPCR反应所需的各种溶液。将2×ShineTaq qPCR SYBR Green Master Mix置于
冰浴上或冰盒内。参考下表在冰上设置PCR反应：
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Component |
20μl Reaction |
50μl Reaction |
Final Concentration |
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2* qPCR SYBR Green Master Mix |
10 μl |
25 μl |
1* |
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10 μm Forward Primer |
0.4 μl |
1.0 μl |
0.2 μm |
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10 μm Reverse Primer |
0.4 μl |
1.0 μl |
0.2 μm |
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Template DNA |
variable |
variable |
variable |
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Nuclease-Free Water |
To 20 μl |
To 50 μl |
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2.当反应性能比较差时，可以在范围内对引物浓度(50nM-500nM )和模板量较高，建议采用两步法PCR
反应程序进行反应
反应程序
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Step |
Temp |
Time |
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Lnitial Denaturation |
95℃ |
5min |
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35-40cycles |
95℃ |
10sec |
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60℃ |
30sec |
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Melting curve analysis |
95℃ |
15sec |
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60℃ |
60sec |
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95℃ |
15sec |
模板量较低等因素导致扩增效果不佳，可使用三步法程序进行PCR反应
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Step |
Temp |
Time |
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Lnitial Denaturation |
95℃ |
5min |
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35-40cycles |
95℃ |
10sec |
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50-60℃ |
10sec |
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72℃ |
10sec |
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Melting curve analysis |
95℃ |
10sec |
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60℃ |
10sec |
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95℃ |
10sec |
标准曲线制作
反应Ct值在20-30之间定量结果最为准确；反应Ct值过低，请稀释模板后重新进行试验；反应Ct
值介于30-35之间时，可尝试提高模板量或扩大；反应体系，进行多次重复进行确认，提高准确性；
反应Ct值＞35之间时，检测结果无法进行定量分析；融解曲线应该呈现单峰曲线，反应特异性好，
无非特异性扩增产物产生，无引物高级结构，表示此时定量结果有效；若融解曲线出现显著多峰，
则定量结果无效。
储存条件：-20℃ 运输 ：冰上运输（避光） 有效期： 1年
相关产品推荐
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货号 |
名称 |
规格 |
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SB-MR009 |
Trizol 总RNA提取试剂盒 |
100 ml |
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SB-RT001 |
一管式反转录试剂盒（55℃，含基因组DNA去除酶及buffer） |
20 μl * 50次 |
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SB-Q204 |
2*Universal SYBR Green Qpcr Premix |
5*1 ml |
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咨询圣尔 |
96孔板 |
10*5 |
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384孔板 |
10*5 |
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封板膜 |
50片/盒 |
