（货号：SB-WB013, 试剂盒包含 250ml A+12.5ml B+10mg BSA） 说明书下载链接： BCA 蛋白浓度检测试剂盒
产品描述
BCA（Bicinchoninic acid）法是目前应用比较广泛的蛋白质浓度测定方法。基于双缩脲反应，即在碱性环境下蛋白质将 Cu2+还原成 Cu+，Cu+ 与 BCA试剂形成紫颜色的络合物，在562 nm处有高的吸光值，该反应产物的量与蛋白质浓度成正比。测定其在562 nm处的吸光值，并与标准曲线对比，即可计算待测蛋白的浓度。该方法快速灵敏、稳定可靠且对不同种类蛋白质变异系数很小。试剂盒中提供了浓度稳定的蛋白标准品用于制作标准曲线。
BCA蛋白浓度测定试剂盒可用于试管法检测，也可用于微孔板法检测。试管法需较大量的蛋白样品（100 μl）和工作液（2 mL），蛋白样品与BCA工作液的比率为1:20（v/v），蛋白质测定范围为20-2000 μg/ml，采用加强法可以检测到5μg/ml；微孔板法操作简单方便，仅需少量（10-25 μl）的蛋白样品和工作液（200 μl），蛋白样品与工作液的比率为1:8（v/v）或者1:20（v/v），蛋白质测定范围为20-2000 μg/ml，采用加强法可以检测到5 μg/ml。我公司提供的BCA蛋白浓度检测试剂盒，比色皿法分别可做125次，酶标法可做1250次。
产品组成
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产品编号 |
产品名称 |
包装 |
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SB-WB013-1 |
BCA试剂 A |
250 ml |
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SB-WB013-2 |
BCA试剂 B |
12.5 ml |
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SB-WB013-3 |
BSA标准品 2 mg/ml |
5*1 ml |
保存方法
室温保存，一年有效。
产品优势
- 准确灵敏：BCA试剂的蛋白质测定范围为10-2000 μg/ml，微孔板法试剂最低检测范围可达 5-250 μg/ml。
- 快速：30分钟即可完成检测，比传统的Lowy法检测速度快4倍而且更加方便。
- 经济实用：除试管外，测定可在微孔板中进行，大大节约样品和试剂用量。
- 检测不同蛋白质分子的变异系数远远小于考马斯亮蓝。
- 可兼容样品中去污剂以及大部分化学物质的影响，可以兼容样品中5%的SDS，5%的Triton X-100，
5%的Tween 20，60，80。（详情见附录）
使用说明
一、配制标准品和工作液
- 配制 BSA 标准品体系
注：BSA标准品浓度为2 mg/ml，稀释液为蛋白样品的溶解液，原则上蛋白样品在什么溶液中，标准品也宜用什么溶液稀释。但也可用水或 1×PBS进行稀释。
BSA标准品体系配制表一。
表一 BSA标准品体系配制（微孔板检测，线性范围20-2000 μg/ml）
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Vial |
稀释液体积(μl) |
BSA 溶液体积(μl) |
BSA终浓度 |
|
A |
0 |
BSA 标准液 100 |
2000 |
|
B |
25 |
BSA 标准液 75 |
1500 |
|
C |
65 |
BSA 标准液 65 |
1000 |
|
D |
35 |
Vial B 35 |
750 |
|
E |
65 |
Vial C 65 |
500 |
|
F |
65 |
Vial E 65 |
250 |
|
G |
65 |
Vial F 65 |
125 |
|
H |
80 |
Vial G 20 |
25 |
|
I |
80 |
0 |
0=Blank |
表二 BSA标准品体系配制（微孔板检测，线性范围 5-250 μg/ml）
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Vial |
稀释液体积(μl) |
BSA 溶液体积(μl) |
BSA终浓度 |
|
A |
70 |
BSA 标准液 10 |
250 |
|
B |
40 |
Vial A 40 |
125 |
|
C |
45 |
Vial B 30 |
50 |
|
D |
40 |
Vial C 40 |
25 |
|
E |
40 |
Vial D 10 |
5 |
|
F |
40 |
0 |
0 |
- 配制 BCA 工作液
1)计算所需要的总 BCA 工作液体积。
- BCA 工作液体积=（标准品数量+待测样品数量）×重复数×每个样品所需要的 BCA 工作液
注：试管法检测时每个样品加 2.0 ml BCA 工作液，微孔板检测每个样品加 200 μl BCA 工作液。
2)配制 BCA 工作液：50 体积的 BCA 试剂 A 中加入 1体积的BCA 试剂 B（A:B=50:1），充分混匀。
注： BCA 工作液装入密封容器内，室温条件24h稳定。
二、检测方法
- 试管检测方法（样品：BCA 工作液=1:20）
1)各取 100 μl 标准品和待测样品加入到反应管中。
2)每管加入 2.0 ml BCA 工作液，混匀。根据待测样品的浓度范围选择孵育时间和温度。
标准孵育方法：37℃孵育 30 min 或者室温 2h （检测范围：20-2000 μg/ml）
增强孵育方法：60℃孵育 30 min（检测范围：5-250 μg/ml）
注意： BCA 检测蛋白浓度，延长孵育时间会加深颜色反应。升高温度会加快显色反应。但是温度升高和时间延长会降低检测下限，以及降低工作线性范围。若蛋白浓度很低，可在较高温度孵育或者适当延长孵育时间。
3)冷却到室温。在分光光度计上进行检测，设定波长为 562 nm，在 10 分钟内对所有样品读数。
注意：由于 BCA 反应达不到真正的反应终点，即使温度降低至室温生色反应液会继续。但是，由于室温下生色比率相当低，因此若是 10 min 内能对所有的样本进行 562 nm 吸光度的测试，不会导致明显错误。
- 根据 BSA 标准品的吸光度（减去标准品中空白孔的OD 值即最终的读数），绘制标准曲线（X-蛋白浓度μg/ml；Y-最终的 OD562nm）。依据标准曲线和样品的稀释倍数计算样品蛋白浓度。
- 微孔板检测方法（样品：BCA 工作液=1:8）
1)各取 25 μl 标准品和待测样品加入到微孔板中。
注：样品与工作液比例为 1:8，若样品有限，可使用 10 μl 标准品和待检测样品进行检测（即 1:20），这时试剂盒的检测范围为 125-2000 μg/ml。
2)每孔加入 200 μl BCA工作液，枪头吹打充分混匀。盖上微孔板，37℃孵育 30 min。
3)冷却到室温，在酶标仪上的 562 nm波长范围处检测吸光度。
4)根据 BSA 标准品的吸光度（减去标准品中空白孔的 OD 值即最终的读数），绘制标准
曲线
