说明书下载链接： 鼠尾基因鉴定试剂盒mouse tail direct PCR kit

目录号：SB-201                             

储存条件：-20°C长期保存。

产品内容：

产品组成	SB-201
Buffer DS1	9ml
Buffer DS2	1 ml
2×Det PCR SuperMix	2.5 ml

 

 

 

本试剂盒专为小鼠快速基因型鉴定而研制，能够迅速从小鼠尾巴、耳朵或脚趾等组织中释放足量的基因组DNA，消化时间仅需15分钟，无需抽提与纯化，可直接将消化产物作为模板进行PCR扩增。试剂盒中配有高扩增兼容性的2xDet PCR SuperMix (Dye+)，PCR反应时只需加入引物和模板即可进行扩增，扩增产物可直接点样电泳。PCR产物的3’端带”A”，可进行TA克隆。

 

建议组织用量(以 50 μl反应体系为例)

50. •3~5 mm 小鼠尾尖
50. •5~10 mm² 小鼠耳朵
50. •1~2 个小鼠脚趾

 

质量控制

25μl PCR反应体系中，以1 μl小鼠尾巴裂解产物为模板，扩增小鼠gapdh基因，30个循环后取产物5μl进行1%琼脂糖凝胶电泳，可见有单一的2 kb条带。

 

操作步骤

1.按小鼠数量配制组织消化液，每个样本采用45μl DS1与5μl DS2混合,现用现配。

2.向每个含有样本的EP管中加入50μl新鲜组织消化液，55℃水浴/金属浴中消化15 min。组织消化时，务必将组织完全浸没于消化液中。消化完成后，组织外观上仍然完整，但足量的基因组DNA已经释放，不影响后续的PCR实验。

3.将样本置于95℃水浴/金属浴中孵育5 min以灭活消化液中的蛋白酶。12000 rpm离心5min，取上清作为PCR模板。消化后的上清可于 -20℃保存三个月。

 

 

 

 

反应实例

反应体系配制			PCR反应循环设置
Template	1 μl		94°C	2 min
Forward Primer (10 μM)	0.5 μl		94°C	10 sec	30-35cycles }
Reverse Primer (10 μM)	0.5 μl		Tm-5°C	10 sec
2× DetPCRSuperMix	12.5 μl		72°C	30 sec/kb
ddH2O	up to 25 μl		72°C	5 min

*最好于低温下配制，试剂全部加好后，瞬时离心，将所有试剂收集到管底。

*结果检测：反应结束后取5 µl反应产物，琼脂糖凝胶电泳检测。

 

注意事项

1.样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA片段较小且提取量下降。

2.提取物4℃可保存1个月, -20℃可保存3个月。