基因过表达技术是通过人工构建的方式在目的基因上游加入调控元件,使基因可以在人为控制的条件下实现大量转录和翻译,从而实现基因产物的过表达。
载体介绍 在真核动物体系中,我司目前主要使用以pcDNA3.1(+)为骨架改造的一系列载体,载体中含有CMV组成型表达启动子或其他启动子来启动转录单元的转录,载体上携带氨苄(Amp)原核抗性和真核筛选标记(可选新霉素(Neo)或G418或Puro)。可针对目的基因序列,设计引物后扩增预期片段,连入原始载体骨架,得到重组载体。
基因敲除是通过采用 RNP 法(Cas9 与 sgRNA形成复合物)替代传统的慢病毒和质粒法,结合自动化移液工作站和高效电转化平台,实现从低通量到高通量的基因敲除技术与产能的发展。同时,运用生物信息学方法优化 gRNA 设计,提高编辑效率并降低脱靶风险。目前已有超过上千篇文章在使用 RNP 基因敲除方法,并逐年增加中,该方法已然在替代慢病毒法和质粒法,成为高通量基因敲除的首选方法。
RNP 法(Cas9 与 sgRNA形成复合物)递送方式
RNP 法会成为基因敲除的首选方法
--更高的编辑效率:RNP 法能够在短时间内实现高效的基因敲除,缩短实验周期;
--更低的毒性:RNP 法避免了病毒及质粒的使用,避免激活细胞内的 DNA/RNA sensing 通路,降低了细胞毒性;
--较低的脱靶效应:RNP 在细胞体内 72 小时内可被降解,相较于传统方法具有更低的脱靶风险;
--更简便的实验操作:RNP 法简化了实验流程,节省了实验时间和成本;
--更快的实验周期:由于高编辑效率和简便的操作,RNP 法能够显著缩短整个实验周期。
常见问题
01
选择哪个细胞敲除?靶细胞中靶基因表达鉴定:深度蛋白质组学分析服务
02
可不可以敲除?靶细胞内靶基因的必要性分析:Essential Score 分析
03
如何敲除?高通量基因敲除:RNP 法
04
敲除效率如何?靶基因敲除效率分析:Sanger 测序 & 蛋白质组学双重保证
编号 | 名称 | 规格编号 | 价格 | 货期 |
SB-JSFW001 | CRISPR(RNP法)基因敲除细胞株构建技术服务(单克隆)含基因水平验证,如需WB验证加3000元 | SB-JSFW001-1T | ¥10,000.00 | 5-8周 |
SB-JSFW001-1T+WB | ¥13,000.00 | 5-8周 | ||
SB-JSFW002 | CRISPR(RNP法)基因敲除细胞株构建技术服务(多克隆)含基因水平验证,如需WB验证加3000元 | SB-JSFW002-1T+WB | ¥11,000.00 | <5周 |
SB-JSFW002-1T | ¥8,000.00 | <5周 | ||
SB-JSFW003 | 过表达细胞株构建技术服务(单克隆)含基因水平验证,如需WB验证加3000元过表达细胞株构建技术服务(单克隆) | SB-JSFW003-1T | ¥10,000.00 | 5-8周 |
SB-JSFW003-1T+WB | ¥13,000.00 | 5-8周 | ||
SB-JSFW004 | 过表达细胞株构建技术服务(多克隆)含基因水平验证,如需WB验证加3000元过表达细胞株构建技术服务(多克隆) | SB-JSFW004-1T | ¥8,000.00 | <5周 |
SB-JSFW005 | WB验证( 公司提供抗体,配套KO或者过表达细胞系的技术服务项目) | SB-JSFW005-1T | ¥3,000.00 | 2周 |