细胞特性 1） 来源： 大鼠肝 2） 形态 ： 上皮细胞 样 3） 含量： >1x10 6 个/mL 4） 污染： 支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性 5） 规格： T75瓶 或者 1mL冻存管包装 运输和保存： 使用 含有 优质胎牛血清的2ml冻存管 发送 存活 细胞 。收到细胞 后， 可 在 1000RPM， 常温 条件 下 ， 离心 5min后 ， 于 洁净操作台弃去上清，加入推荐使用的培养基 后 转移至 250px培养皿 或者 T75培养瓶 中培养 ， 传代 达到 细胞生长状态良好时，再 进行 冻存。 具体 操作见 细胞 培养步骤。 细胞用途： 仅供科研使用。 细胞培养步骤 一． 培养基 及 培养 冻存 条件准备： 1） 准备 DMEM-H 培 养基(DMEM -H ，GIBCO，货号12800017，添加NaHCO 3 1.5g/L)，90%；胎牛血清，10%。 2） 培养条件 ： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度 ， 培养箱湿度为 70 %-80%。 3） 冻存液 ： 90 %完全培养基， 10 %DMSO ， 现用 现 配 。 液氮储存。 二． 细胞 处理 ： 1） 复苏细胞： 将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或 将细胞悬液加入 250px皿中 ， 加入 约 8 ml 培养基， 培养过夜） 。第二天换液并检查细胞密度。 2） 细胞传代： 如果 细胞 密度达8 0%-90% ， 即 可进行 传代培养 。 对于 贴壁 细胞， 传代可参考以下方法： 1. 弃去 培养上清，用不含钙 、镁离子 的 PBS润洗细胞1 -2 次 。 2. 加2ml消化液 （ 0.25 %Trypsin-0.53mM EDTA） 于 培养瓶中，置于 37℃ 培养箱 中消化1 - 2分钟 ，然后在显微镜下观察 细胞消化 情况， 若 细胞大部分变圆 并脱落 ，迅速拿回操作台，轻敲 几下 培养瓶后加少量培养基终止 消化 。 3. 按6 -8ml/ 瓶补加 培养基，轻轻打匀后吸出 ，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。 4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例 分到新的 含8 ml 培养基 的新皿中或者瓶中 。 3）细胞 冻存： 待 细胞生长状态良好时， 可 进行 细胞 冻存 。贴壁 细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶， 细胞 变圆脱落后，加入约 1 ml 含 血清的培养基后 加入 冻存管中，再添加 10 %DMSO 后 进行冻存 。 |
