MDA-MB-468/ADR人乳腺癌阿霉素耐药株 SB-YMD-002
圣尔生物share-bio
MDA-MB-468/ADR人乳腺癌阿霉素耐药株
货 号 | SB-YMD-002 | ||
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规 格 | T25 | ||
品 牌 | 圣尔生物share-bio |
产品编号 | 名称 | 包装 | 品牌 | 目录价 | 促销价 | 货期 | 数量 | 购物车 |
SB-YMD-002 | MDA-MB-468/ADR人乳腺癌阿霉素耐药株 | T25 | 圣尔生物share-bio | ¥2500.00 |
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产品详情 | 细胞特性 1) 来源:乳腺癌 2) 形态:上皮细胞样,贴壁生长 3) 含量:>1x106 个/mL 4) 污染:支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性 5) 规格:T25瓶或者1mL冻存管包装 细胞培养步骤 一.培养基及培养冻存条件准备 1) 准备L15培养基;优质胎牛血清,10%;双抗,1%。 2) 培养条件: 气相:空气,100%;该细胞培养不能通入CO2。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。 3) 冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。 二. 细胞处理 1) 复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入250px皿中,加入约8ml培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。 2) 细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。 对于贴壁细胞,传代可参考以下方法 1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。 3. 按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。 4. 将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。 注:第一次传代推荐传代比例为1:2,以后传代比例可根据客户需要自己决定。 3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。 下面T25瓶为类; 1,细胞冻存时,弃去培养基后,PBS清洗一遍后加入1ml胰酶,细胞变圆脱落后,加入1ml含血清的培养基终止消化,可使用血球计数板计数。 2,4min 1000rpm 离心去掉上清。加1ml血清重悬细胞,根据细胞数量加入血清和DMSO,轻轻混匀,DMSO终浓度为10%,细胞密度不低于1x106/ml,每支冻存管冻存1ml细胞悬液,注意冻存管做好标识。 3,将冻存管置于程序降温盒中,放入-80度冰箱,至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 |
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储存条件: | 1) 1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中,置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输;收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养,如无法立刻进行复苏操作,冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。 2) T-25培养瓶充满完全培养基后进行常温运输;收到细胞后请镜下观察细胞生长状态,如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作,如悬浮的细胞较多,请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。 |
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